RNA逆转录试剂盒 RNA的自我复制和逆转录在什么地方进行

文章目录：

1. RNA的自我复制和逆转录在什么地方进行
2. 逆转录的原料是
3. RNA逆转录生成的是双链DNA吗?为什么
4. 求助Real-Time PCR的详细步骤及注意事项

RNA的自我复制和逆转录在什么地方进行

RNA自我复制在宿主细胞的细胞质中进行 逆转录在宿主细胞的细胞核中 因为逆转录出的DNA往往要和宿主细胞自身的DNA整合的

逆转录的原料是

RNA逆转录的产物是DNA，所以该过程需要的原料应该是4种游离的脱氧核苷酸（胞嘧啶脱氧核苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸、胸腺嘧啶脱氧核苷酸、腺嘌呤脱氧核苷酸）。除非题目中有其他提示，否则你给出的答案肯定有误。

RNA逆转录生成的是双链DNA吗?为什么

1、先是合成与RNA互补的DNA单链，然后DNA单链在DNA聚合酶的作用下继续合成为DNA双链。

2、逆转录（reverse transcription）是以RNA为模板合成DNA的过程，即RNA指导下的DNA合成。是RNA病毒的复制形式，需逆转录酶的催化。

3、过程：先是以RNA为模版，在逆转录酶的作用下合成与其碱基互补配对的DNA单链，然后再以DNA单链为模版在DNA聚合酶的作用下继续合成双链DNA。

4、逆转录是RNA病毒的复制形式，需要逆转录酶的催化。

5、艾滋病病毒(HIV)就是一种典型的逆转录病毒。

求助Real-Time PCR的详细步骤及注意事项

实时荧光定量PCR技术即是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR避免了传统PCR以终产物检测定量产生的偏差，提高实验的重复性。该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果。主要实验步骤如下：

1.设计并合成RealtimePCR引物。

2.引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶进行含SG（SYBR®Green）的PCR反应的优化。

3.样品RNA抽提a．实验对象为组织样品，取适量（50-100mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml的RNA抽提试剂Trizol（Invitrogen），匀浆后抽提RNA。b．实验对象为细胞样品，每份样品取1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加1ml的RNA抽提试剂Trizol（Invitrogen），裂解后抽提RNA。

4.RNA质量检测a．紫外吸收测定法测定RNA在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，以计算其浓度并评估RNA纯度。b．使用甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳，检测RNA纯度及完整性。

5.使用逆转录酶（Promega）进行反应，将样品RNA逆转录为cDNA。

6.制备标准曲线样品：进行相对定量，需要先将样品的目的基因以及管家基因进行PCR扩增，其产物进行梯度稀释用于做标准曲线7.标准曲线样品和待测样品分别加入到含SG的RealTimePCR反应液中（其中TaqBeadTM热启动聚合酶来自Promega公司），进行RealTimePCR扩增和检测8.检测结果进行标准曲线分析，以对待测样品的目的基因进行定量。相对定量实验需要进一步用样品的目的基因测得值除以管家基因测得值以校正误差，所得结果代表某样品的目的基因相对含量。

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