pcr的复性温度 pcr室最适温度

pcr室最适温度

PCR实验室对温度没有严格要求，从实验室人性化考虑，人体温度在环境温度(18℃～25℃，相对湿度:50%)，人体感觉比较舒适。因此，PCR实验室应通过各种措施，保证环境温度、湿度控制在一定范围之内。

PCR实验室又称为基因扩增实验室，利用分子生物学技术，通过放大DNA片段，也可以看做是生物体外的特殊DNA复制。利用基因追踪系统，掌握人体内部的病毒含量，此种试验的精确度可达到纳米级别。

pcr室的最适温度是72度

1、变性反应温度的设置

当温度控制在90 °C以上时DNA会发生变性，双链DNA解链成单链。

2、退火反应温度的设置

当温度下降到50 °C的时候，DNA复性，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。

3、扩增反应温度的设置

当温度上升到72 °C左右时延伸，DNA 聚合酶在此时有最大活性，能够催化4 种脱氧核苷酸合成新的DNA链。

pcr的复性指什么

引物的复性温度就是变性温度后一段温度较低的时期，在该阶段，引物单链和变性期已经解链的模板单链结合，这就是引物退火过程，该过程需要的温度就是复性温度。该温度十分重要，可决定pcr的特异性以及扩增效率。

PCR中的退火的目的就是复性。复性温度可以理解是DNA的一种性质，退火温度是PCR时为了达到让DNA充分复性所采用的温度

pcr设定温度怎么来的

pcr温度设定主要是4个依据：

1. DNA变性温度，这个一般而言94～98℃都能保证DNA完全变性，双链分开；

2.DNA复性，这个主要是指引物与模板DNA的复性，通过碱基配对形成双链DNA，因此，复性温度因引物不同而有差别；

3.DNA聚合酶活性，这个来源不同，不同突变，略有差异，一般65～72℃。

4.DNA 保存温度，一般情况下DNA在4～15℃可以稳定保存一定时间。因此，pcr结束后保持在这个温度均可。

复性温度对pcr的影响

复性温度（annealing temperature）是指PCR反应中用于引导引物与DNA模板进行杂交的温度。复性温度的选择对PCR反应的特异性和产物数量有着重要影响。如果复性温度设置过低，可能会导致非特异性杂交和产物数量过多，而过高的复性温度则可能导致引物与DNA模板不能完全杂交，从而影响PCR反应的特异性和产物数量。

因此，复性温度的选择需要根据引物序列和PCR反应体系进行优化。

PCR循环参数是如何确定的

在选择的变性温度下，DNA分子越长，两条链完全分开所需的时间也越长。如果变性温度过低或时间太短，模板DNA中往往只有富含AT的区域被变性。在PCR的第一个循环中，有时常把变性时间设计为5

min，来增加大分子模板DNA彻底变性的概率，又称此为预变性。当模板DNA的G+C含量超过55%时，需要更高的变性温度，来源于古细菌的DNA聚合酶比TaqDNA聚合酶更能耐受高温，因此更适合用来扩增富含GC的DNA模板。

复性过程（即退火）采用的温度至关重要。如果复性温度太高，寡核苷酸引物不能与模板很好地复性，扩增效率将会非常低。如果复性温度太低，引物将产生非特异性复性，从而导致非特异性的DNA片段的扩增。

bp/min。根据多数研究者的经验，确定了一个规则，即：靶基因的每1 000 bp的扩增产物的延伸时间被设计为1

min，以此类推。对于PCR的最后一个循环，许多研究者常把延伸时间增加为以前循环的延伸时间的3倍以上，以使所有扩增产物完成延伸，这又称为后延伸。

（4）循环数目一般都为30，这个数值是怎么来的？PCR扩增所需的循环数目决定于反应体系中起始的模板拷贝数以及引物延伸和扩增的速率。一旦PCR反应进入几何级数增长期，反应会一直持续下去，直至某一成分成为限制因素。从这一点上来说，扩增产物中绝大多数应该是特异性的扩增产物，而非特异性的扩增产物低到难以检测的程度。用TaqDNA聚合酶在一个含有105个拷贝的靶序列的反应体系中进行30个循环后往往可以做到上述的理想情况。

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